应用酵母双杂交技术筛选白细胞cDNA文库与NS5ATP1结合蛋白基因

作者：刘敏成军张树林王琳邵清**梁耀东

来源：世界华人消化杂志, 2004, (04): 86-89.

• cDNA文库
• 基因表达谱
• NS5ATP1
• 酵母双杂交技术
• 结合蛋白
• 酵母表达载体
• 肌动蛋白素
• 反式调节
• 编码基因
• 亚砷酸盐

目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与NSA5TP1结合蛋白的编码基因. 方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增NS5ATP1基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DH5α),提出质粒并测序,进行生物信息学分析. 结果:成功克隆出NS5ATP1基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/Trp-Leu-Ade-His)培养基及铺有X- α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落10个,...

• 单位
  解放军第302医院; 西安交通大学