慢病毒介导酪氨酸激酶受体A过表达载体促进神经干细胞增殖和分化的实验研究

作者：邓明; 谢萍; 马永刚^*; 周炎; 贺斌; 陈庆; 吴飞; **辉; 明江华

来源：安徽医药, 2020, 24(12): 2410-2547.

• 受体,Eph家族
• 神经干细胞
• 慢病毒属
• 转染
• 增殖
• 分化
• 大鼠,Sprague-Dawley

目的探究酪氨酸激酶受体A(Trk A)过表达载体对神经干细胞增殖和分化能力的影响。方法取SD大鼠海马组织进行提取神经干细胞,采用免疫荧光的方法对神经球进行鉴定,利用siRNA技术构建Trk A过表达载体,将培养的神经干细胞分成三组,空白对照组为未做任何处理的细胞组,阴性对照组是经空白载体的慢病毒转染的细胞组,实验组是由Trk A的过表达载体构建的慢病毒转染细胞组。逆转录PCR(RT-PCR)检测Trk A和神经干细胞分化标志基因Tuj1,GFAP和CNPase的表达,CCK-8试剂盒检测各组细胞的增殖率。结果免疫荧光染色显示神经干细胞细胞球Nestin(红色荧光),Brud染色(绿色荧光)阳性,且占细胞量的90%以上;荧光双标染色(棕色荧光)显示双染细胞量占总细胞量的90%以上,说明培养的细胞是神经干细胞。慢病毒滴度的检测结果:Trk A过表达慢病毒载体转染滴度为3×108TU/mL。RT-PCR结果表明,空白对照组(1.09±0.09)和阴性对照组(1.11±0.05)的Trk A的mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05),实验组的Trk A的mRNA相对表达量(7.12±1.32)要明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);神经干细胞分化标志基因Tuj1,GFAP和CNPase的表达与Trk A相同。CCK-8试剂盒检测结果表明,空白对照组、阴性对照组及实验组的细胞增殖率分别为(87.92±9.21)%、(88.22±9.37)%、(176.01±11.33)%(F=18.082,P<0.05),其中空白对照组和阴性对照组的细胞增殖率比较差异无统计学意义(P>0.05),实验组的细胞增殖率要明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论Trk A过表达载体可以促进神经元干细胞向神经元细胞,星型胶质细胞和少突胶质细胞的分化,并且可以促进神经元干细胞的增殖。

• 单位
  武汉市第三医院; 武汉大学人民医院