家兔β干扰素启动子质粒的构建及其启动子活性鉴定

作者：陈萌萌; 范志宇; 胡波; 宋艳华; 魏后军; 仇汝龙; 朱伟峰; 徐为中; 王芳^*

来源：江苏农业科学, 2019, 47(23): 78-81.

DOI：10.15889/j.issn.1002-1302.2019.23.018

• 家兔
• 兔出血症病毒
• IFN-β基因
• 启动子
• 荧光素酶
• 转录调控

通过家兔体内感染兔出血症病毒(RHDV)后发现体内干扰素-β(Interferon-β,IFN-β)基因表达水平明显降低。为体外研究RHDV感染宿主后IFN-β启动子的调控机制,首先以家兔肝细胞总cDNA为模板,利用PCR扩增IFN-β基因启动子区的序列,经测序确定全长为550 bp;预测软件分析,与人源IFN-β基因启动子的转录上调区域(positive regulation domain,PRD)高度同源;随后将启动子全长和一系列转录元件克隆至pGL6-Basic荧光素酶表达载体中,成功构建重组体报告基因质粒后,瞬转RK-13细胞,利用试剂盒检测荧光素酶的相对活性。结果显示,克隆的IFN-β基因启动子区和AP-1、IRF3、NF-κB和IRF7等转录元件具有显著的活性,为研究兔出血症病毒对宿主IFN-β基因的转录调控机制提供了有效的工具。

• 单位
  江苏省农业科学院