融合蛋白NusA-hRI的高效异源表达、纯化及活性分析

作者：付大伟^*; 孙莹莹; 徐伟

来源：中国生物工程杂志, 2019, 39(03): 21-28.

DOI：10.13523/j.cb.20190304

• 人核糖核酸酶抑制因子
• 融合标签
• 诱导表达
• 磁珠纯化
• 亲和层析

人核糖核酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)是一种能够调节核糖核酸酶活性的酸性包浆蛋白。通过构建含SUMO、IF2、GST、NusA、MsyB、Trx和MBP融合标签的重组表达载体,以大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌进行自诱导(auto-induction,AI)表达,从而使hRI的表达量得以提升。利用MagNi磁珠纯化及电泳分析hRI的表达状况,通过RNase/Sepharose亲和层析获得纯度较高的蛋白。纯化后获得的融合蛋白浓度为2 960. 513mg/L,与其它公司的hRI活性进行比较,检测其酶活性约为50U/μl,并使其成功用于RNA的保护,为Nus A-hRI的应用提供理论依据。

• 单位
  哈尔滨商业大学