补肾活血方联合富血小板血浆对脂肪间充质干细胞增殖活性和功能表达的影响

作者：李玲慧; 李凯明; 杨少锋; 朱立国^*; 王尚全; 陈明; 梁龙; 展嘉文

来源：海南医学院学报, 2019, 25(20): 1521-1531.

DOI：10.13210/j.cnki.jhmu.20190923.001

• 补肾活血方
• 富血小板血浆
• 脂肪间充质干细胞
• 增殖活性
• 功能表达

目的:探讨补肾活血方联合富血小板血浆对共培养体系中脂肪间充质干细胞(ADSCs)增殖活性和功能表达的影响。方法:取手术患者皮下脂肪组织及退变髓核组织,采用多次酶消化法原代分离、培养ADSCs及NPCs,建立细胞共培养体系。纳入腰椎间盘退变患者,连续服用补肾活血方2周,分别于初次服药前和末次服药后1 h抽取静脉血,采用二次离心法制备富血小板血浆,以不同血浆干预培养,实验共分为5组:富血小板血浆组(PRP)、贫血小板血浆组(PPP)、含药富血小板血浆组(M-PRP)和含药贫血小板血浆组(M-PPP)、胎牛血清组(FBS)。倒置显微镜下观察共培养体系中细胞的形态变化;采用MTT法分别在干预24、48 h及72 h检测细胞增殖率;一周后采用甲苯胺蓝染色检测蛋白聚糖表达情况;两周后采用RT-PCR法检测细胞COL2A1、ACAN、SOX9基因表达水平。结果:本研究经原代消化分离、共培养体系中获得的细胞胞质体积略增大,形态由长梭形逐渐转变为短梭形或多角形为主,折光性较好。采用MTT法检测发现,与FBS组相比,PRP组及M-PRP组细胞增殖率显著提高(P<0.05)。甲苯胺蓝染色结果显示,M-PRP组、M-PPP组及PRP组细胞的数量及阳性染色率均明显高于PPP组和FBS组,其中M-PRP组的作用最显著。RT-PCR结果显示,与FBS组相比,PRP组和M-PRP组COL2A1 mRNA表达显著上调(P<0.05),其余组无明显变化(P>0.05);PRP组ACAN mRNA表达显著上调(P<0.05);PRP组和M-PRP组SOX9 mRNA表达量维持不变(P>0.05)。结论:补肾活血方联合富血小板血浆可以提高共培养体系中ADSCs细胞增殖活性,上调COL2A1、ACAN、SOX9的mRNA表达,促进成软骨分化,为椎间盘退变的治疗提供了新方向。

• 单位
  中国中医科学院望京医院; 湖南中医药大学第一附属医院