miR-29a抑制胃癌细胞内靶基因VEGF-A的表达及意义

作者：王国威; 王宗华; 王仙园; 范亚川; 邹利全; 李学成; 陈陵

来源：西南国防医药, 2014, 24(01): 6-9.

DOI：10.3969/j.issn.1004-0188.2014.01.003

• 微RNAs
• 血管内皮生长因子
• miR-29a
• 胃癌

目的验证胃癌细胞株SGC-7901内miR-29a对靶基因VEGF-A的直接调控作用。方法采用负载miR-29a的腺病毒载体(Ad-miR29a)感染人胃癌细胞株SGC-7901,上调SGC-7901细胞内miR-29a的表达丰度后,采用RT-qPCR及Western blot法分别检测SGC-7901细胞内VEGF-A在mRNA及蛋白水平的表达;进一步采用双荧光素酶实验及突变实验,验证miR-29a是否通过结合在VEGF-A 3’UTR而直接抑制靶基因表达。结果与感染阴性对照Ad-LacZ的SGC-7901细胞相比,感染Ad-miR29a的SGC-7901细胞内VEGF-A蛋白表达下降(0.42±0.02 vs.0.91±0.03,P<0.01),且VEGF-A mRNA水平亦下调(0.75±0.21 vs.1.15±0.25,P<0.05);荧光素酶实验显示,与阴性对照相比,转染miR-29a mimic后,HEK293细胞萤火虫荧光素酶活性明显下降(0.56±0.13 vs.0.93±0.06,P<0.05);而在VEGF-A 3’UTR与miR-29a的结合位点被突变之后,HEK293细胞萤火虫荧光素酶活性得以恢复。结论 miR-29a通过结合于VEGF-A 3’UTR相应位点,直接抑制VEGF-A在mRNA及蛋白水平的表达。miR-29a可能成为胃癌基因治疗的有效靶标。

• 单位
  中国人民解放军第三二四医院; 第三军医大学