秦川牛胎儿成纤维细胞表达A-FABP基因条件的优化和鉴定

作者：严兴荣; 杨艳红; 丁向彬; 葛秀国; 郭宏; 谢鑫; 崔继红; 李立文; 陈富林

来源：基因组学与应用生物学, 2012, 31(06): 544-548.

• 秦川牛
• 胎儿成纤维细胞
• A-FABP
• 转基因

为了向转基因牛提供过表达A-FABP的供核细胞,本研究从NCBI中查找牛脂肪型脂肪酸结合蛋白(Albert,A-FABP)基因全长cDNA序列,通过简并密码子的方法设计特异性引物。A-FABP基因通过公司合成,与pEGFP-C1载体连接形成重组质粒pEGFP-C1-A-FABP。分离获得3株秦川牛胎儿成纤维细胞(battle embryonic fibroblast,BEF),分别用DMEM和D/F12进行培养,随机选择一株细胞优化外源基因转染条件。用优化的条件转染这3株细胞,800μg/mLG-418进行筛选,挑取单克隆,获得稳定转染A-FABP的细胞株。PCR和RT-PCR检测细胞A-FABP基因的表达。结果显示,D/F12比DMEM能促进细胞的增殖(p<0.05);细胞在高糖DMEM的转染效率显著高于D/F12(p<0.05);2株胎儿成纤维细胞(1雄1雌)获得5株稳定表达的细胞,其中4株来源于雌性细胞。结果证明细胞培养基、性别和细胞系影响牛A-FABP转基因效率。

• 单位
  天津农学院; 唐都医院; 西北大学; 第四军医大学; 生命科学学院