溶氧反馈-补料分批技术高密度培养基因重组MAGE1/HSP70/MAGE3工程菌

作者：胡沛臻; 温江田; 路凡; 王孝功; 李侠; 司少艳; 葛伟; 黄杨; 张秀敏; 隋延仿

来源：第三军医大学学报, 2007, (16): 1576-1579.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2007.16.003

• 黑色素瘤抗原
• 重组
• 大肠杆菌
• 发酵

目的建立人黑色素瘤抗原MAGE1/HSP70/MAGE3融合蛋白基因重组工程菌E.coli.BL21/pET-MHM的高密度发酵工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,扩大至NBS BiofloⅣ20L发酵罐发酵,利用溶氧反馈-补料分批培养技术,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如发酵培养基、活化时间、诱导浓度及时间、pH值及分批补加营养物质等进行优化。结果保持培养过程中40%的溶解氧,采用半合成培养基、活化至对数生长期时0.2mmol/LIPTG诱导5h以及以甘油为碳源连续流加补料的条件发酵,连续3批重复发酵,最终菌密度D(600)均达45～50时,菌体量可提高至70g/L以上,目的蛋白的表达量占菌体蛋白总量的38%以上。结论确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺。

• 单位
  西京医院; 第四军医大学