定量检测百日咳黏附素的ELISA法建立及初步应用

作者：祝传顺; 周振发; 洪禹; 薛莹; 刘冉; 唐林; 姚雷^*; 朱卫华

来源：中国新药杂志, 2022, 31(09): 854-858.

• 酶联免疫吸附测定
• 百日咳黏附素
• 质量控制
• 定量ELISA

目的：建立定量检测吸附无细胞百白破（组分）联合疫苗（DTaP）生产过程中黏附素（pertactin,PRN）含量的方法。方法：以高效价兔抗PRN多克隆抗体为包被抗体，羊抗PRN多抗为检测抗体，采用辣根过氧化物酶标记的兔抗羊抗体，建立双抗体夹心间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定PRN抗原的含量并进行方法学验证。结果：建立的ELISA法在3.906 25～500 ng·mL-1PRN浓度区间有最佳线性，相关系数r> 0.95；该法对PRN检测有良好的特异性；实验内和实验间检测250,60,15 ng·mL-1浓度下PRN含量，变异系数为1.987%～9.785%、回收率为93.1%～103.5%。该法精密度和准确度较好，该法的定量限度为15 ng·mL-1。同时探讨了建立的双抗体夹心ELISA法的初步应用，测定了PRN纯化步骤的回收率以及联合疫苗中PRN组分的含量和吸附率。结论：建立的ELISA法可有效检测百日咳疫苗纯化过程中PRN的含量，为DTaP生产过程的质量控制奠定了重要基础。