长链非编码RNA膀胱癌相关转录因子1通过微小RNA-142/自噬相关蛋白7调节自噬对喉癌细胞化疗耐药的影响

作者：张正艳; 马文学^*; 齐静静; 代红磊

来源：中国耳鼻咽喉头颈外科, 2022, 29(08): 483-488.

DOI：10.16066/j.1672-7002.2022.08.002

• 喉肿瘤
• 耐药性,药物耐受性
• 长链非编码RNA膀胱癌相关转录因子1
• 微小RNA-142
• 自噬

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)膀胱癌相关转录因子1(bladder cancer-associated transcript 1，BLACAT1)在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma，LSCC)细胞化疗耐药中的作用。方法 通过顺铂诱导喉癌细胞株Hep-2，建立顺铂耐药喉癌细胞模型(Hep-2/R)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中lncRNA BLACAT1、微小RNA-142(microRNA-142，miR-142)和自噬相关蛋白7(autophagy-related protein 7，ATG7)mRNA的表达；Western blot检测细胞中ATG7、多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein 1，MRP1)和微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3，LC3)-II/LC3-I和Beclin 1的表达；MTT实验检测细胞活力。双荧光素酶报告基因实验分别检测BLACAT1和miR-142及miR-142和ATG7之间的靶向作用。结果 Hep-2/R组细胞中lncRNA BLACAT1表达水平(3.58±0.47)显著高于Hep-2组(1.00±0.06)，差异有统计学意义(t=9.431，P<0.05)。Hep-2/R组细胞中miR-142表达水平(0.35±0.04)显著低于Hep-2组(1.00±0.05)，差异有统计学意义(t=17.583，P<0.05)。与Vector组比较，pcDNA-BLACAT1组Hep-2细胞活力显著升高；与NC-siRNA组比较，BLACAT1-siRNA组Hep-2/R细胞活力显著降低。与WT-BLACAT1和NC mimic共转染组相比，WT-BLACAT1和miR-142共转染的细胞中萤光素酶活性显著降低(t=10.832，P<0.05)；与Vector组比较，pcDNA-BLACAT1组细胞中miR-142表达显著降低；与WT-ATG7和NC mimic共转染组相比，WT-ATG7和miR-142共转染的细胞中萤光素酶活性显著降低(t=8.203，P<0.05)；与NC mimic组比较，miR-142 mimic组细胞中ATG7蛋白水平均显著降低。使用自噬抑制剂3-MA处理Hep-2细胞后，pcDNA-BLACAT1显著促进自噬蛋白ATG7、LC3-II/LC3-I和Beclin 1的表达，miR-142 mimic处理后自噬蛋白水平降低。使用DDP处理Hep-2/R细胞后，BLACAT1-siRNA显著抑制Hep-2/R细胞活力和MRP1蛋白的表达，而miR-142 inhibitor逆转这一结果。结论 LncRNA BLACAT1通过miR-142/ATG7信号通路促进LSCC细胞的自噬和化疗耐药性。

• 单位
  荆门市第二人民医院