全人源抗肝癌重组免疫毒素的制备及其对肝癌细胞的杀伤作用

作者：王子露; 朱进; 丁贵鹏; 孙景军; 张建平; 冯振卿; 管晓虹

来源：南京医科大学学报(自然科学版), 2005, (07): 480-483.

DOI：10.3969/j.issn.1007-4368.2005.07.014

• 重组免疫毒素
• 肝细胞癌
• 全人抗体
• Abrin-A
• MAGE

目的:构建及表达全人源抗肝癌MAGE鄄A1单链抗体(A3)与相思子毒素A链(Abrin鄄A)的原核表达载体,并检测其对人BEL7402肝癌细胞系的杀伤作用。方法:应用PCR方法体外扩增A3基因,经测序后重组入原核表达载体pBAD/gⅢ鄄Abrin鄄A相应位点上,将构建正确的pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A表达质粒转化E.coliTOP10,左旋阿拉伯糖诱导表达。表达产物经蛋白纯化及活性鉴定,采用MTT法检测其对BEL7402细胞的体外杀伤作用。结果:构建的重组免疫毒素表达载体pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A,诱导表达产物主要以包涵体形式存在,分子量约60kD;纯化的pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A对BEL7402细胞的最大杀伤率为70.17%,IC50为3.12μg/ml。结论:构建、表达的全人源抗肝癌A3/Abrin鄄A融合免疫毒素对肝癌细胞有较明显的杀伤作用。

• 单位
  南京医科大学; 南京医科大学第二附属医院