1-甲基色氨酸对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞通透性及凋亡的影响

作者：王元元; 许铎; 沈继龙; 周情太; 赵慧静; 陈亚利; 汪明灯^*

来源：中华急诊医学杂志, 2021, 30(01): 59-63.

• 1-甲基色氨酸
• 脂多糖
• 脓毒症
• 内皮细胞
• 通透性
• 凋亡

目的探讨1-甲基色氨酸(1-methyltryptophan, 1-MT)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)通透性及细胞凋亡的影响。方法将HUVECs分为三组, 即磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline, PBS对照组)、1 μg/mL LPS(LPS组)、含有LPS及1 mmol/L 1-MT(1-MT组)。采用蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测孵育8 h后的p120连环(p120 concatemer, p120ctn)、血管内皮钙粘蛋白(vascular endothelial cadherin, VE-cadherin)、caspase-3及DNA修复酶多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(DNA repair enzyme polyadenylate ribose polymerase-1, PARP-1)的表达。采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)分别检测孵育2、4、6和8 h的犬尿氨酸(kynurenine, Kyn)浓度, 并计算吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase, IDO)活性。组间两两均数比较用LSD-t检验。结果与PBS对照组相比较, LPS组caspase-3 [(74.01±7.91)%vs(157.14±7.63)%, P<0.01]、Kyn表达显著增高, 而p120ctn [(49.12±2.15)%vs(37.61±1.80)%, P<0.01]、VE-cadherin [(107.70±7.01)%vs(90.66±2.58)%, P=0.027]及抗凋亡蛋白PARP-1 [(67.95±3.08)%vs(57.93±5.26)%, P=0.038]水平显著降低, IDO活性升高(P<0.05)。与LPS组比较, 1-MT组caspase-3 [(157.14±7.63)%vs(110.74±7.89)%,P<0.01]表达显著降低, 然而p120ctn [(37.61±1.80)%vs(47.19±0.82)%, P<0.01] 、VE-cadherin [(90.66±2.58)%vs(107.27±9.89)%, P=0.029]及PARP-1 [(57.93±5.26)%vs(74.12±4.90)%, P=0.005]表达显著升高, 不同时间点IDO活性均降低(P<0.05)。PBS组和1-MT组p120ctn、VE-cadherin、PARP-1蛋白水平、Kyn浓度及IDO活性差异无统计学意义(P>0.05), 1-MT组caspase-3蛋白水平较PBS组升高(P=0.001)。结论 LPS刺激HUVECs通透性增加, 而1-MT可通过抑制IDO活性和降低Kyn水平拮抗LPS的刺激作用, 此外, 1-MT还可降低细胞凋亡, 其机制可能是通过增加PARP-1表达, 降低caspase-3水平, 从而发挥内皮细胞的保护作用。

• 单位
  南京医科大学