摘要
目的:探究干扰素-α (interferon-α, IFN-α)对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)患者外周血CD56dimCD57+自然杀伤(natural killer, NK)细胞凋亡和杀伤功能的调控作用及具体机制。方法:选取大连医科大学附属第二医院就诊的64例初治SLE患者和16例健康人(healthy control, HC)为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测NK细胞杀伤功能相关分子的基因表达水平;将CD56dimCD57+NK细胞与K562细胞共培养后,采用膜联蛋白和7氨基放线菌素标记凋亡的K562细胞;用浓度分别为20、40、80μmol/L的过氧化氢(hydrogen peroxide, H2O2)处理外周血单个核细胞,并以不使用H2O2处理作为对照组,采用流式细胞术检测穿孔素(per-forin, PRF)表达水平;采用酶联免疫吸附试验测定血清中IFN-α的浓度;采用流式细胞术检测CD56dimCD57+NK细胞表面IFN-α受体(interferon-α receptor, IFNAR)表达水平,并用平均荧光强度(mean fluorescence intensity, MFI)表示;用浓度为1 000 U/mL的IFN-α处理CD56dimCD57+NK细胞24、48、72 h,并以不使用IFN-α处理作为对照组,采用流式细胞术检测细胞凋亡及线粒体活性氧(mitochondrial reactive oxygen species, mtROS)表达水平,并用MFI表示。结果:与HC(n=3)相比,SLE患者(n=3)外周血总NK细胞的PRF1基因表达水平降低(1.24±0.41 vs. 0.57±0.12,P=0.05)。与HC(n=5)相比,SLE患者(n=5)外周血CD56dimCD57+NK细胞杀伤K562细胞的能力明显下降(58.61%±10.60%vs. 36.74%±6.27%,P<0.01)。与对照组(n=5, 97.51%±1.67%)相比,不同浓度的H2O2处理可显著下调CD56dimCD57+NK细胞的PRF表达水平且呈剂量依赖性,浓度为20μmol/L的H2O2组PRF为83.23%±8.48%(n=5,P<0.05),浓度为40μmol/L的H2O2组PRF为79.53%±8.56%(n=5,P<0.01),浓度为80μmol/L的H2O2组PRF为76.67%±7.16%(n=5,P<0.01)。与HC (n=16)相比,系统性红斑狼疮疾病活动评分(systemic lupus erythematosus disease activity index, SLEDAI)为中高疾病活动度(SLEDAI≥10)的SLE患者(n=45)血清IFN-α水平显著增高[(55.07±50.36) ng/L vs.(328.2±276.3) ng/L,P<0.001]。同时与HC (n=6)相比,SLE患者(n=6)外周血CD56dimCD57+NK细胞IFNAR1表达增高(MFI:292.7±91.9 vs. 483.2±160.3,P<0.05),与HC (n=6)相比,SLE患者(n=7)外周血CD56dimCD57+NK细胞IFNAR2表达增高(MFI:643.5±113.7 vs. 919.0±246.9,P<0.05)。与对照组(n=6)相比,IFN-α刺激(n=6)可显著促进CD56dimCD57+NK细胞凋亡(20.48%±7.01%vs. 37.82%±5.84%,P<0.05)。同时,与对照组(n=4, MFI:1 049±174.5)相比,不同时间下用IFN-α刺激CD56dimCD57+NK细胞可显著促进mtROS的产生,且呈时间依赖性,48 h的MFI为3 437±1 472 (n=4,P<0.05), 72 h的MFI为6 495±1 089 (n=4,P<0.000 1),而刺激24 h时差异无统计学意义。结论:SLE患者血清中高水平的IFN-α可能通过促进mtROS产生诱导细胞凋亡并抑制PRF表达,下调CD56dimCD57+NK杀伤功能。
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单位基础医学院; 大连医科大学