恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶在大肠埃希菌中的可溶性表达、纯化和鉴定

作者：李妍; 宁云山; 董文其; 李明

来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2004, (02): 30-33.

• 恶性疟原虫
• 谷氨酸脱氢酶
• 基因表达
• 蛋白质印迹试验

目的　在大肠埃希菌 (E .coli)中尝试非融合蛋白技术可溶性表达恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶 (GDH) ,以获得具有相对完整空间表位的重组非融合GDH。　方法　将恶性疟原虫GDH基因克隆到pET 2 3 (a)表达载体中 ,转化E .coliBL2 1菌株 ,异丙基 β D 硫代半乳糖苷诱导表达 ,菌体反复冻融后 ,通过十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析表达产物的存在形式 ,可溶性表达产物经Source Q及Source S层析纯化并用SDS PAGE分析纯度。通过蛋白质印迹试验鉴定表达和纯化产物的免疫学活性。　结果　可溶性重组GDH分子占宿主蛋白 15 %左右 ,相对分子质量为 5 2 0 0 0。经过阴离子和阳离子交换层析纯化后 ,GDH纯度达 90 %以上。该蛋白质具有良好的抗原性。　结论　通过E .coli表达系统和柱层析分离技术可获得高纯度、具有相对完整空间表位的重组GDH分子

• 单位
  南方医科大学