siRNA特异抑制树突状细胞BAK基因表达的研究

作者：余森辉; 曹以诚

来源：现代食品科技, 2010, 26(7): 693-696.

DOI：10.3969/j.issn.1673-9078.2010.07.010

• 树突状细胞
• BAK
• 小干扰RNA

本文探讨了小干扰RNA(siRNA)对人树突状细胞(DC)中促凋亡基因BAK表达的影响.针对BAK基因区设计了2条高效特异的siRNA,合成相应的oligo DNA;构建重组质粒psi-BAK-1与psi-BAK-2,并对这些质料进行了限制性酶切、测序等鉴定工作;在脂质体的介导下转染树突状细胞,转染后72h收集细胞,用蛋白印迹法检测Bak蛋白的表达量;并通过流式细胞仪检测转染后72 h树突状细胞的存活率.结果表明,经过酶切鉴定和测序证实两个重组质粒psi-BAK-1、psi-BAK-2分别构建成功;Western Blot结果显示转染后72 h,si-BAK-1对Bak蛋白表达的抑制率为(51.5±3.54)%,si-BAK-2对Bak蛋白表达的抑制率为(26.5±6.36)%;转染重组质粒后72 h树突状细胞存活率分别为93.95%、89.66%,均高过对照组的88.00%.si-BAK-1、si-BAK-2都能有效降低树突状细胞中BAK基因的表达,为延长树突状细胞的寿命,增强抗原递呈能力提供了新的思路和方法.

• 单位
  华南理工大学