流式细胞术检测单核细胞体外吞噬致敏红细胞实验方法的建立

作者：朱思颖; 姬艳丽; 王贞; 陈大伟; 廖志坚; 莫春妍; 温机智; 罗广平; 魏玲^*

来源：中国输血杂志, 2022, 35(08): 814-816.

DOI：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2022.08.008

• 单核细胞
• 吞噬作用
• 流式细胞术
• 单核细胞单层试验(MMA)

目的 建立流式细胞术检测单核细胞体外吞噬致敏红细胞的实验方法。方法 从献血者外周血中分离单个核细胞，在培养板中体外培养1 h,分离并获取贴壁的单核细胞。采用PKH26荧光染料标记Dib阳性红细胞、IgG抗-Dib单抗致敏已标记红细胞，将致敏红细胞加入到单核细胞中进行体外吞噬试验(阳性对照组)。同时以10%胎牛血清(FBS)的RPMI-1640致敏红细胞组作为阴性对照。用FITC抗人CD14标记单核细胞，通过流式细胞术检测吞噬情况，并计算吞噬效率。并采用该方法检测单核细胞对不同效价人源IgG抗-D致敏红细胞的吞噬效率。结果 阴性对照组与阳性对照组中，单核细胞吞噬率分别平均为5%(1.2%～7.6%,SD值为3.30)与81%(71.4%～92.7%,SD值为8.65)。抗-D介导的单核细胞吞噬活性与效价相关，抗体效价<32时，吞噬效率在10%以内；抗体效价在32～128时，吞噬效率呈指数增长；抗体效价≥256时，吞噬效率进入平台期，稳定在80%。结论 成功建立了流式细胞术检测单核系统体外吞噬致敏红细胞的检测平台，可用来评估红细胞同种或自身IgG抗体是否具有临床意义。

• 单位
  广州血液中心