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摘要
目的探讨微小RNA(miR)-133b靶向调控多聚嘧啶通道结合蛋白1(PTBP1)调控乳腺癌细胞生物学的行为机制。方法选取乳腺癌及癌旁组织标本83例, 收集患者临床病理资料, 同时选取乳腺癌细胞系(MCF-7)、正常乳腺上皮细胞系(MCF-10A), 实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-133b和PTBP1 mRNA表达, 分析与临床病理特征的关系, MCF-7细胞分为阴性对照组、miR-133b模拟物(mimic)组、miR-133b inhibitor组、miR-133b mimic+PTBP1沉默组和miR-133b inhibitor+和PTBP1沉默组, 噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测MCF-7细胞增殖及周期的变化, 划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移及侵袭, 蛋白质印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和PTBP1蛋白表达, 双荧光素酶实验验证miR-133b对PTBP1的靶向调控机制。多组间比较采用单因素方差分析, 两两比较采用LSD-t检验, 计数资料采用χ2检验和Fisher精确检验进行分析。结果 miR-133b和PTBP1 mRNA在乳腺癌组织(0.94±0.18、4.28±0.27)及乳腺癌细胞的表达水平(1.09±0.22、3.65±0.19)分别明显低于和高于癌旁组织(2.12±0.09、t=4.343, P<0.05;1.37±0.21、t=6.006, P<0.05)及MCF-10A细胞(1.99±0.11、t=5.223, P<0.05;1.15±0.09、t=5.774, P<0.05)。miR-133b和PTBP1均与TNM分期(1.204±0.057、3.865±0.172, χ2=6.217, P<0.001)和淋巴转移(0.489±0.041、1.632±0.147, χ2=7.031, P<0.001)等明显相关, 而与年龄(0.601±0.052、2.008±0.187, χ2=0.261, P>0.05)、分化程度(0.592±0.057、1.994±0.187, χ2=0.274, P>0.05)和病理分级无关(0.587±0.059、1.921±0.172, χ2=0.257, P>0.05)。与阴性对照组比较, miR-133b mimic组增殖率[(35.43±1.74)%、(8.43±0.35)%, F=166.465, P<0.05]、迁移、侵袭细胞数(109±10.562、77±5.751, t=4.663, P<0.05;128±11.624、81±7.251, t=7.453, P<0.05)、bcl-2(2.78±0.32、0.76±0.11, t=4.122, P<0.05)和PTBP1表达(3.45±0.33、0.89±0.26, t=3.154, P<0.05)明显降低, G1期阻滞明显延长(F=276.872, P<0.05), bax表达明显增加(1.22±0.12、3.39±0.46, t=9.123, P<0.05), miR-133b mimic+PTBP1沉默组变化更为明显(1.22±0.12、7.71±0.23, t=6.009, P<0.05), miR-133b inhibitor组明显逆转上述指标变化(1.22±0.12、0.76±0.11, t=3.334, P<0.05), miR-133b inhibitor+PTBP1沉默组逆转更为明显(1.22±0.12、0.33±0.11, t=5.098, P<0.05)。双荧光素酶实验显示miR-133b可靶向调控PTBP1。结论 miR-133b靶向调控PTBP1从而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。
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