布鲁氏菌BP26蛋白的原核表达及鉴定

作者：鲁友铭; 李俊萱; 吴胜昔; 曾政^*; 黄恒; 李令臣; 侯力嘉

来源：重庆理工大学学报：自然科学, 2019, 33(10): 185-190.

• 布鲁氏菌
• BP26重组蛋白
• 原核表达
• 镍柱纯化
• 蛋白免疫印迹

为了实现布鲁氏菌BP26蛋白在原核宿主细胞进行高效表达,对布鲁氏菌BP26基因进行密码子优化,化学合成了BP26全基因,并将其克隆至pET30a(+)载体上,构建重组质粒pET30a(+)-bp26,转化至基因工程菌BL21(DE3),利用IPTG进行诱导表达。利用His-tag镍柱纯化BP26重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果显示:重组质粒经Nde I与Xhol I双酶切,酶切产物通过琼脂糖凝胶电泳显示与目的产物条带大小一致;当诱导条件为IPTG浓度1 mmol/L,37℃诱导8 h时,重组蛋白的表达量最高;纯化后的目的蛋白经过Western Blot鉴定,显示在27. 8 kD左右有一条明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。本研究成功实现了在大肠杆菌高效表达BP26蛋白,为后续布病检测新试剂的研制及疫苗的研发奠定了生物学基础。

• 单位
  重庆理工大学; 生物工程学院