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摘要
壳聚糖酶在壳寡糖酶法制备过程中发挥重要作用，高效制备壳聚糖酶为其产业化应用奠定基础。采用同源克隆获得萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)Rk1壳聚糖酶基因(bacsn46)。将密码子优化和分子伴侣蛋白共表达进行结合，实现萎缩芽孢杆菌壳聚糖酶(BaCsn46)高效表达。通过表征分析获得重组BaCsn46酶学特性。bacsn46基因全长825个碱基，编码274个氨基酸，其中前32个氨基酸为信号肽序列。在7 L发酵罐条件下，重组菌最高发酵酶活力和总蛋白质量浓度分别达到7 356 U/mL和5.95 g/L。重组BaCsn46最适反应温度和pH分别是60℃和6.0,金属离子Mg~(2+)和Mn~(2+)对重组BaCsn46具有激活作用，重组BaCsn46最小和最适水解底物分别是壳四糖和95%脱乙酰度胶体壳聚糖。此外重组BaCsn46能够高效水解不同浓度胶体壳聚糖，制备不同聚合度壳寡糖。
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