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摘要
目的 了解山西省绵羊捻转血矛线虫的感染现状及遗传变异情况。方法 采集山西省晋北的山阴县、晋中的祁县和晋南的稷山县绵羊粪样，并提取粪样基因组DNA。利用捻转血矛线虫种特异性引物，扩增样品的核糖体内转录间隔区-2 (ITS-2)部分序列，经凝胶电泳观察和DNA测序分析鉴定其种属，评估不同地区绵羊捻转血矛线虫的感染现状。取PCR阳性样品，采用扩增捻转血矛线虫ITS全长序列的保守引物，PCR扩增ITS全长序列并测序，在DNAMAN 9.0中与GenBank中已公开的捻转血矛线虫ITS-2和ITS全长序列进行比对，查找碱基变异位点。使用DNAstar 7.1软件计算捻转血矛线虫ITS序列的碱基含量，并对GenBank中已报道的不同地区、不同宿主来源的18条捻转血矛线虫ITS全长序列及本研究获得的2条ITS全长序列进行序列相似性分析，用最大似然法构建基于ITS全长序列的系统进化树，分析捻转血矛线虫的遗传变异情况。结果 共采集401份绵羊粪样，其中69份粪样扩增出ITS-2片段（17.2%）；序列分析结果显示，获得的ITS-2部分序列与捻转血矛线虫（GenBank登录号OQ674251）的序列相似性为100%，故鉴定为捻转血矛线虫。其中山阴县、稷山县和祁县的绵羊捻转血矛线虫阳性率分别为47.4%(64/135)、3.0%(5/169)和0 (0/97)。69份ITS-2阳性的粪样中，4份样品成功扩增出ITS全长序列，其存在两种基因型，且这两种基因型之间仅在ITS-1序列中226 bp处存在1个碱基差异。基于捻转血矛线虫ITS全长序列的序列相似性分析发现，两种基因型之间的变异率仅为0.1%;18条不同地区和不同宿主来源的捻转血矛线虫的序列间变异率为0～2.6%。系统进化树分析结果显示，本研究中鉴定的序列（GenBank登录号OP518297和OP518298）与来自美国（GenBank登录号EU086378）、老挝（GenBank登录号AB908961）和中国其他地区（GenBank登录号HQ844231）的序列处于同一分支上；捻转血矛线虫的群体遗传结构无明显的地理和宿主相关性。结论 山西省调查地区的绵羊捻转血矛线虫感染率较高，捻转血矛线虫的遗传变异率较低，与其他地区、不同宿主来源的捻转血矛线虫之间无明显差异。
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