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摘要
玉米赤霉烯酮(ZEN)是具有雌激素作用的次生代谢产物，可以被来源于Gliocladium roseum的内酯水解酶降解为无毒物质。为了实现玉米赤霉烯酮降解酶基因zlhy-6在枯草芽孢杆菌中的表达，获得不含抗生素抗性基因的食品级重组枯草芽孢杆菌，本研究采用一步克隆及重叠延伸PCR的方法构建了单启动子和包含HpaⅡ和P43双启动子的表达质粒，将质粒转化到枯草芽孢杆菌中，获得重组菌株168/pMA5-zlhy-6和168/pMA5-P43-zlhy。然后构建了重组整合载体amy-p43-zlhy,将zlhy-6基因整合到枯草芽孢杆菌168的基因组中。通过Cre/lox系统敲除抗生素抗性基因，获得整合了P43-zlhy表达盒的食品级重组枯草芽孢杆菌BZ-zlhy。将构建的3个重组菌株在37℃、pH值7.5条件下培养36 h,结果显示，双启动子表达载体重组菌株的最高酶活性为2.2 U·mL-1,是单启动子菌株的1.2倍。双启动子重组菌株表达的降解酶对ZEN(4μg·mL-1,30 min)的降解率为65.1%。重组菌株枯草芽孢杆菌BZ-zlhy表达水平最低(0.4 U·mL-1)。本研究实现了玉米赤霉烯酮降解酶在枯草芽孢杆菌中表达，同时构建了不含抗生素抗性基因的食品级重组枯草芽孢杆菌，为玉米赤霉烯酮降解酶的工业化生产奠定了基础，也为解决粮食储藏和饲料生产中的ZEN污染提供了思路。
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