人源化抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原单链抗体的设计和表达

作者：李冰; 张军; 徐俊杰; 刘树玲; 付玲; 李建民; 陈薇

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2010, (02): 145-148.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.005361

• 单链抗体
• 免疫原性
• 人源化
• 炭疽 single-chain antibody
• immunogenicity
• humanization
• anthrax

目的:应用抗体"框架区重塑"技术,对鼠单克隆抗体(mAb)框架区进行人源化,制备人源化单链抗体(scFv)并检测其活性。方法:在获得抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原鼠mAb(5E1)可变区基因的基础上,保持鼠mAb互补决定区(CDR)不变,选择与框架区同源性最高的人源序列替换鼠mAb的框架区,保留个别关键的鼠源残基。通过融合PCR技术构建人源化的scFv,并在大肠杆菌中进行了表达。表达产物以包涵体形式存在,通过变性、镍柱亲和层析和复性,获得复性后的可溶蛋白。对纯化产物进行了SDS-PAGE、ELISA和抑制炭疽毒素中和活性的检测。结果:人源化后的序列具有与鼠源scFv一致的抗原结合活性和细胞水平的中和...

• 单位
  军事医学科学院; 病原微生物生物安全国家重点实验室