酿酒酵母甲酸脱氢酶在大肠杆菌中的高效表达、纯化及其酶学性质

作者：倪敏君; 范立强; 王怡; 张锐; 赵健; 李素霞

来源：中国生物制品学杂志, 2011, (07): 761-765+774.

DOI：10.13200/j.cjb.2011.07.18.nimj.002

• 酿酒酵母
• 甲酸脱氢酶类
• NADH
• 克隆
• 分子
• 基因表达 Saccharomyces cerevisiae
• Formate dehydrogenases
• Cloning
• molecular
• Gene expression

目的克隆酿酒酵母甲酸脱氢酶(Formate dehydrogenase,FDH)基因,在大肠杆菌中表达、纯化重组蛋白,并进行酶学性质分析。方法以酿酒酵母基因组DNA为模板,采用温度梯度PCR法扩增fdh基因,重叠PCR技术校正fdh中的移码突变,构建重组表达质粒pET-28a-fdh,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,分别采用37℃IPTG诱导、15℃IPTG诱导和37℃乳糖自诱导表达,镍金属螯合亲和层析纯化重组FDH蛋白,并分析重组FDH的酶学性质。结果成功克隆了1 100 bp的fdh基因,碱基突变纠正了基因缺失和置换引起的编码错误;表达的重组FDH相对分子质量约为43 000,37℃乳...

• 单位
  华东理工大学; 生物反应器工程国家重点实验室