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摘要
目的：探讨鹿茸多肽（VAP）预处理对叔丁基过氧化氢（TBHP）诱导大鼠心肌H9c2细胞损伤的保护作用，阐明VAP对miR-133a/转化生长因子β (TGF-β)/Smad轴的作用及其机制。方法：将H9c2心肌细胞分为空白对照组、空白血清组、TBHP组、TBHP+低剂量（100 mg·kg-1）VAP组、TBHP+高剂量（400 mg·kg-1） VAP组和miR-133抑制剂（miR-133 inhibitor）组。空白对照组不做任何处理，其余各组细胞经VAP处理24 h后，给予200μmol·L-1 TBHP处理；miR-133inhibitor组细胞转染miR-133 inhibitor 24 h，给予400 mg·kg-1 VAP处理24 h，并给予200μmol·L-1TBHP处理。MTT法检测各组H9c2细胞存活率，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组细胞培养上清液中肌钙蛋白T (cTnT)、肌钙蛋白I (cTnI)和肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平，实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组H9c2细胞中miR-133表达水平，Western blotting法检测各组H9c2细胞中转化生长因子β1 (TGF-β1)、磷酸化Smad2/3 (p-Smad2/3)和Smad4蛋白表达水平。结果：MTT法检测，与TBHP组比较，TBHP+低剂量VAP组和TBHP+高剂量VAP组H9c2细胞存活率升高（P<0.05）, miR-133inhibitor组H9c2细胞存活率差异无统计学意义（P>0.05）。ELISA法检测，与空白对照组比较，TBHP组H9c2细胞中cTnT、cTnI和CK-MB水平升高（P<0.05）；与TBHP组比较，TBHP+低剂量VAP组和TBHP+高剂量VAP组H9c2细胞中cTnT、cTnI和CK-MB水平降低（P<0.05）。RT-qPCR法检测，与空白对照组比较，TBHP组H9c2细胞中miR-133a表达水平降低（P<0.05）；与TBHP组比较，TBHP+低剂量VAP组和TBHP+高剂量VAP组H9c2细胞中miR-133a表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,miR-133 inhibitor组H9c2细胞中miR-133a表达水平明显降低（P<0.01）。Western blotting法检测，与空白对照组比较，TBHP组H9c2细胞中TGF-β1、 p-Smad2/3和Smad4蛋白表达水平升高（P<0.05）；与TBHP组比较，TBHP+低剂量VAP组和TBHP+高剂量VAP组H9c2细胞中TGF-β1、p-Smad2/3和Smad4蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论：VAP预处理通过miR-133a调控TGF-β/Smad信号通路保护TPHP诱导的大鼠心肌H9c2细胞损伤。
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