pcDNA3.1(+)-NPM1真核表达质粒构建

作者：孟倩; 雷婷; 张曼

来源：标记免疫分析与临床, 2018, 25(04): 560-564.

• 核仁磷蛋白1
• 质粒构建
• pcDNA3.1(+)

目的构建pc DNA3.1(+)-NPM1真核表达质粒,体外转染人膀胱移行细胞癌pumc-91细胞并观察其表达情况。方法设计引物,采用PCR扩增核仁磷蛋白1(Nucleophosmin,npm1)基因编码序列;运用基因重组方法对其进行双酶切,插入pc DNA3.1(+)载体,经菌液PCR、测序对重组质粒进行鉴定。将成功构建的质粒经脂质体介导转染至pumc-91细胞,Western blot验证蛋白表达情况。结果经菌液PCR、测序鉴定表明成功构建pc DNA3.1(+)-NPM1质粒,将成功构建的质粒转染至pumc-91细胞,Western blot证实转染pc DNA3.1(+)-NPM1表达质粒的pumc-91细胞npm1蛋白过表达。结论成功构建pc DNA3.1(+)-NPM1重组质粒,为进一步研究NPM1蛋白的功能奠定基础。

• 单位
  北京大学; 首都医科大学附属北京世纪坛医院