miR-142-5p通过直接靶向ELK1调控动脉粥样硬化内皮细胞凋亡

作者：羌玲玉; 汤小星; 孙晓晖^*

来源：中国老年学杂志, 2020, 40(23): 5026-5031.

• 动脉粥样硬化
• miR-142-5p
• ELK1
• 细胞凋亡

目的探讨微小RNA-142-5p(miR-142-5p)通过直接靶向包含转录激活因子ETS样蛋白(ELK)1调控动脉粥样硬化内皮细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人主动脉内皮细胞(HAEC),氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激HAEC,采用qRT-PCR检测细胞中miR-142-5p及ELK1 mRNA的表达水平,Western印迹检测细胞中ELK1及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2蛋白表达水平,流式细胞术检测HAECs凋亡率。双荧光素酶报告基因鉴定miR-142-5p的靶基因。细胞转染anti-miR-142-5p、anti-miR-con、pcDNA、pcDNA-ELK1,Western印迹与qRT-PCR检测miR-142-5p对靶基因ELK1的调控作用。流式细胞术检测miR-142-5p与ELK1表达变化对HAECs凋亡的作用。Western印迹检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达。结果 ox-LDL刺激HAECs后miR-142-5p及Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达上调,ELK1与Bcl-2蛋白表达下调,细胞凋亡率增加,与ox-LDL刺激前相比差异显著(P<0.05);双荧光素酶报告基因验证ELK1是miR-142-5p的靶基因;抑制miR-142-5p或ELK1过表达后细胞凋亡率降低,Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达下调,而Bcl-2蛋白表达上调;抑制ELK1表达可逆转anti-miR-142-5p对细胞凋亡的抑制作用;抑制miR-142-5p表达后p-GSK-3β、β-catenin、c-myc蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),anti-miR-142-5p与si-ELK1共同转染后p-GSK-3β、β-catenin、c-myc蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论 miR-142-5p可通过直接靶向ELK1促进人主动脉内皮细胞凋亡,其可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路而发挥作用。

• 单位
  南通市老年康复医院; 南通大学; 解剖学教研室; 南通市中医院