重组酶介导等温扩增法检测食品中铜绿假单胞菌

作者：姚丽锋; 冯家望; 张娟; 黎财慧; 丁琦; 张晴阳; 严家俊; 游淑珠; 符家忍; 王小玉^*

来源：食品安全质量检测学报, 2022, 13(17): 5695-5701.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2022.17.031

• 铜绿假单胞菌
• lasB基因
• 重组酶介导等温扩增

目的 建立重组酶介导等温扩增(recombinase-aided amplification, RAA)法快速、灵敏、特异检测食品中铜绿假单胞菌的分析方法。方法 针对铜绿假单胞菌lasB基因的特异性保守区域,设计RAA特异性引物和exo探针,筛选出最优组合;对提取的目标基因组DNA进行检测,确定方法的特异性和灵敏度,并通过人工污染实验,比对不同检测方法对食品样品的检出限。结果 建立的铜绿假单胞菌lasB基因RAA检测方法特异性良好,仅对铜绿假单胞菌有扩增曲线,对其他致病菌无交叉反应;方法对纯菌液的灵敏度为1.7 pg/μL。人工污染实验表明,方法对肉类样品中铜绿假单胞菌的检出限与传统方法一致,达1.0×103CFU/mL;RAA方法检测时间仅需20min。结论 本研究建立的铜绿假单胞菌实时荧光RAA检测方法特异性强、灵敏度高、反应时间短,可用于食品中铜绿假单胞菌的快速检测。

• 单位
  拱北海关技术中心; 广东产品质量监督检验研究院