siRNA干扰小鼠睾丸支持细胞uPA表达的初步研究

作者：胡廉; 刘燕; 李红钢; 熊承良

来源：中国细胞生物学学报, 2012, 34(10): 998-1003.

• uPA
• RNA干扰
• siRNA
• TM4细胞
• 基因表达

该研究在验证小鼠睾丸支持细胞TM4有内源性uPA基因表达的基础上,针对uPAmRNA靶序列设计三段不同的siRNA序列(si-uPA),通过瞬时转染TM4细胞,筛选确定uPA基因的有效干扰序列。将该有效干扰序列进行时效、量效实验,观察siRNA对TM4细胞uPA mRNA和蛋白表达的影响。结果显示,siRNA的最佳转染浓度为50 nmol/L。三种si-uPA转染TM4细胞后,uPA mRNA和蛋白表达量均较空白对照组明显下降(P<0.05),以si-uPA1作用最为明显。si-uPA1转染24 h后,转染组细胞uPA mRNA的表达均较对照组显著降低,其中100 nmol/L组抑制效果最为明显,抑制率达到70%;随转染时间的延长,uPA mRNA表达持续降低,转染72 h后,三组转染细胞uPA mRNA表达量分别为对照组的53.9%、35.3%和27.7%(P<0.05)。该研究成功筛选出针对uPA mRNA靶序列的有效干扰序列,抑制效应持续至72 h;同一时间点内,抑制效应随转染浓度的增加而增强,表现出良好的量效关系。

• 单位
  华中科技大学同济医学院