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摘要
目的 观察竹节香附素A(Raddeanin A,RA)对人结肠癌HCT116细胞株上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其可能机制。方法 收集结肠癌患者的结肠癌组织标本和正常结肠组织标本，免疫组化实验检测β-连环蛋白(β-catenin)和上皮型钙黏蛋白(E-cad)的表达情况，通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测不同浓度的RA(1、2、4、8、16μmol/L)对HCT116细胞株的增殖抑制情况。运用转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白诱导建立HCT116细胞株EMT模型。通过划痕实验及Transwell实验分别观察RA 1、2μmol/L对EMT模型(TGF-β1诱导组)细胞迁移、侵袭能力的影响。免疫蛋白印迹(Western Blot,WB)实验和实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验分别检测β-catenin、E-cad、波形蛋白(Vimentin)、Snail相关蛋白及基因的表达情况。结果 免疫组化结果显示，β-catenin蛋白在结肠癌组织中的表达高于正常结肠组织(P <0.05),E-cad蛋白表达减少(P <0.05)。MTT实验结果显示，RA能显著抑制HCT116细胞株增殖(P <0.05)，并呈浓度依赖性(P <0.05)。划痕实验及Transwell实验分别证实，经TGF-β1诱导后的HCT116细胞株迁移和侵袭能力均显著增强(P <0.05,P <0.01)，且WB和qRT-PCR实验结果显示，E-cad蛋白和基因表达减少(P <0.05,P <0.01),Vimentin、Snail、β-catenin蛋白和基因表达增加(P <0.05,P <0.01)，说明造模成功。划痕实验显示，RA 1、2μmol/L作用于EMT模型细胞后，划痕愈合率较TGF-β1诱导组降低(P <0.05,P <0.01)，且RA 2μmol/L组低于RA 1μmol/L组(P <0.05)，提示细胞迁移能力减弱; Transwell实验显示，RA 1、2μmol/L可抑制穿膜细胞数，与TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P <0.05,P <0.01)，且RA 2μmol/L组低于RA 1μmol/L组(P <0.05)。WB及qRT-PCR实验显示，RA 1、2μmol/L组Wnt/β-catenin通路相关因子β-catenin，以及EMT相关因子Vimentin、Snail蛋白和基因表达较TGF-β1诱导组显著下降(P <0.05,P <0.01),E-cad蛋白和基因表达较TGF-β1诱导组升高(P <0.05,P <0.01)。结论 RA可通过Wnt/β-catenin通路抑制HCT116细胞株EMT作用，从而减少细胞的侵袭和转移。
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