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摘要
目的 探究鹿红方防治心肌缺血/再灌注损伤的机制。方法 选取无特定病原体(SPF)级Wistar雄性大鼠40只，随机分为对照组、模型组、鹿红方低剂量组、鹿红方中剂量组、鹿红方高剂量组，根据鹿红方不同的剂量，连续灌胃7 d后，结扎左前降支30 min后复灌24 h制备心肌缺血再灌注损伤模型。将H9c2心肌细胞分为对照组、模型组、鹿红方低剂量组、鹿红方中剂量组、鹿红方高剂量组。鹿红方低剂量组、鹿红方中剂量组、鹿红方高剂量组分别加入6%、12%、18%鹿红方含药血清预处理，经液体石蜡封闭12 h后复氧2 h制备心肌缺氧/复氧模型。造模成功后取材，观察心肌梗死面积，苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织形态，检测心肌组织中血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量，DNA断裂的原位末端标记(TUNEL)染色观察心肌细胞凋亡，蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心脏组织中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap-1)及核因子相关因子-2(Nrf2)蛋白含量。流式细胞观察H9c2心肌细胞凋亡率，检测心肌细胞及培养基中SOD、MDA、LDH含量，Western Blot检测心肌细胞中Keap-1及Nrf2蛋白含量。结果 与对照组比较，模型组心肌梗死面积较大，心肌细胞凋亡率较高，心肌细胞出现水肿、坏死的程度较重，MDA浓度明显升高，GSH和SOD含量明显下降(P<0.05),鹿红方低、中、高剂量组可以明显改善上述情况，以中、高剂量组最优。与对照组比较，模型组H9c2心肌细胞凋亡率较高，心肌细胞培养基上清液中LDH含量明显升高，心肌细胞中MDA浓度升高，SOD含量明显降低(P<0.05),而鹿红方低、中、高剂量可以有效改善上述指标，以中、高剂量组效果最优。在大鼠心肌缺血再灌注模型及H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型中，与对照组比较，模型组Nrf2蛋白表达下降，鹿红方可以上调Nrf2蛋白表达，以中、高浓度效果最明显。此外，与对照组比较，模型组亚铁离子含量明显升高(P<0.05),鹿红方可以减低亚铁离子含量(P<0.05)。结论 鹿红方可以减轻心肌缺血再灌注损伤，其机制可能与激活Keap-1/Nrf2/ARE抗氧化信号通路有关，从而减轻氧化应激，此外，减轻亚铁离子的蓄积可能是其潜在机制。
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单位上海中医药大学附属曙光医院
