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摘要
目的 筛选并鉴定多房棘球蚴感染的小鼠脾淋巴细胞中差异表达的微小RNA (miRNA)，分析其可能涉及的生物学过程及信号通路，为进一步研究miRNA在寄生虫感染中的作用提供实验依据。方法将12只小鼠随机分为两组，每组6只，感染组小鼠每只腹腔注射600个多房棘球蚴原头节，对照组注射等量PBS。感染后90 d，将小鼠安乐死后取脾组织，采用密度梯度离心法分离各组小鼠脾淋巴细胞，使用TRIzol法提取两组小鼠脾淋巴细胞的总RNA。利用高通量测序技术鉴定并筛选差异表达的mi RNA；随机选取5个差异表达的miRNA进行实时荧光定量PCR (qRT-PCR)验证；利用miRanda和RNAhybrid两个数据库对差异表达的mi RNA进行靶基因预测，并进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析；利用Cytoscape软件构建mi RNA-mRNA相互作用网络图。结果 通过高通量测序对照组和感染组分别获得12 104 631和10 856 249个纯净序列，其序列主要集中在20～24 nt。共筛选出69个差异表达2倍以上的miRNA，其中40个为上调表达的mi RNA, 29个为下调表达miRNA。随机选取的5个差异表达miRNA经qRT-PCR验证结果显示，mi R-150-5p、mi R-181a-5p、 miR-467a-5p、 miR-467b-5p表达下调，miR-223-3p表达上调，与高通量测序结果相一致。GO功能和KEGG通路分析结果显示，69个差异表达miRNA的靶基因与黏膜免疫、应激反应、细菌防御反应等相关，并且主要富集在丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PI3K-Akt)、单磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPK）等信号通路。miR-150-5p、 miR-181a-5p、 miR-467a-5p和mi R-467b-5p与m RNA相互作用网络图显示，miRNA与多个mRNA相互作用，mRNA也可被多个miRNA所调控。结论 小鼠在多房棘球蚴感染过程中，其脾淋巴细胞中的miRNA呈显著差异表达，差异表达的miRNA主要富集在一些免疫相关的信号通路，可能在对抗多房棘球蚴的免疫反应中发挥作用。
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