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摘要
为了确定非洲马瘟病毒（AHSV）VP5蛋白的免疫学特性，通过人工合成非洲马瘟病毒VP5蛋白的S6全长基因序列，经PCR扩增后克隆到转座质粒载体pFastBac HTb上，将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞，通过蓝白斑试验筛选出重组杆状病毒质粒Bacmid-AHSVS6，转染Sf9昆虫细胞。构建了重组质粒pFastBac-AHSVS6，拯救获得含有AHSV S6基因的重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot鉴定表明，在Sf9昆虫细胞中成功表达分子量大小为60 ku的AHSV VP5重组蛋白。采用组氨酸标签纯化树脂对重组VP5蛋白进行纯化，将其用弗氏佐剂乳化后3次免疫新西兰大白兔收集血清，获得了针对AHSV VP5蛋白的多克隆抗体，并通过Western-blot和间接免疫荧光试验验证了该抗体的特异性。本试验利用杆状病毒表达系统成功表达了AHSV全长VP5重组蛋白，成功制备出特异的VP5蛋白多克隆抗体，这为进一步研究AHSV VP5蛋白的功能及亚单位疫苗研制奠定了基础。
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