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摘要
为了提高了FAD依赖的葡萄糖脱氢酶在毕赤酵母中的表达量，本研究通过G418浓度梯度筛选，构建含有不同分子伴侣基因拷贝数共表达毕赤酵母重组菌株实现高效表达，优化摇瓶发酵条件。经G418浓度梯度筛选，得到1株高产重组菌，在此基础上分别构建了HAC1、Ero1、PDI三种分子伴侣1-4拷贝共表达重组菌株，RT-qPCR检测结果符合预期。试管水平酶活表明3拷贝PDI、3拷贝HAC1和2拷贝Ero1分别比1拷贝提高83%、77%和51%。总体比较而言，共表达3拷贝PDI的重组菌株酶活最高，比对照提高198%，优化摇瓶发酵条件表明培养基初始pH 7.0，摇瓶装液量50 mL，甲醇添加量1%，诱导温度28℃时，效果最佳。通过抗生素浓度筛选、增加分子伴侣的基因拷贝数策略可以提高FAD-GDH在毕赤酵母中的发酵产量。
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单位河北省微生物研究所
