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摘要
目的探讨组蛋白甲基转移酶(EZH2)抑制剂对脓毒症小鼠腹腔巨噬细胞极化的影响及其作用机制。方法选取36只健康雄性C57BL/6J小鼠, 按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、脓毒症模型组(CLP组)和EZH2抑制剂干预组(CLP+3-DZNeP组), 每组12只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症动物模型;Sham组不结扎、穿刺盲肠。CLP+3-DZNeP组分别于制模前24 h和制模后1 h腹腔注射3-DZNeP 1 mg/kg。每组取8只小鼠于术后24 h处死, 应用高通量液相蛋白芯片分别检测腹腔灌洗液中白细胞介素-?6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;应用流式细胞仪检测巨噬细胞极化标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和CD206表达;以贴壁法分离、纯化小鼠腹腔巨噬细胞, 用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测巨噬细胞EZH2和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的蛋白表达。各组剩余小鼠于术后48 h处死, 采用苏木素-伊红(HE)染色观察肺脏、肾脏组织病理学改变。结果与Sham组比较, CLP组小鼠肺脏和肾脏组织炎性细胞浸润增加, 腹腔灌洗液中促炎细胞因子IL-6和TNF-α水平显著升高〔IL-6(ng/L):7?794.75±405.56比78.63±74.09, TNF-α(ng/L):147.25±25.19比18.20±5.03, 均P<0.01〕, M1型巨噬细胞占比增多〔iNOS+ F4/80+:(13.18±8.80)%比(1.57±0.77)%, P<0.05〕, 腹腔巨噬细胞中EZH2蛋白表达明显增高(EZH2/GAPDH:0.84±0.11比0.11±0.03, P<0.01), PPARγ蛋白表达则明显降低(PPARγ/GAPDH:0.09±0.01比0.27±0.09, P<0.01)。与CLP组比较, CLP+3-DZNeP组小鼠肺脏和肾脏组织病理学改变明显缓解, 腹腔灌洗液中促炎细胞因子表达水平显著降低〔IL-6(ng/L):4?207.10±876.60比7?794.75±405.56, TNF-α(ng/L):63.00±25.37比147.25±25.19, 均P<0.01〕, M1型巨噬细胞占比显著降低〔iNOS+ F4/80+:(3.64±0.89)%比(13.18±8.80)%, P<0.05〕, M2型巨噬细胞占比显著增高〔CD206+ F4/80+:(17.68±5.63)%比(7.60±3.17)%, P<0.01〕, 腹腔巨噬细胞中EZH2蛋白表达明显下降(EZH2/GAPDH:0.53±0.09比0.84±0.11, P<0.05), PPARγ蛋白表达则明显增高(PPARγ/GAPDH:0.39±0.14比0.09±0.01, P<0.05)。结论脓毒症诱导腹腔巨噬细胞EZH2高表达, 并可能通过抑制PPARγ蛋白表达诱导M1型巨噬细胞极化, 促进炎性细胞因子释放;EZH2特异性抑制剂3-DZNeP能明显抑制腹腔巨噬细胞M1型分化, 从而减轻炎症反应。
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单位同济大学附属东方医院; 上海市东方医院吉安医院
