人参多糖对D-半乳糖诱导的PC12细胞拟老化模型自噬和相关信号通路的影响

作者：乔巨慧; 刘颖; 邢欣; 赵大庆; 刘美辰^*

来源：中药材, 2020, 43(10): 2519-2524.

DOI：10.13863/j.issn1001-4454.2020.10.033

• 人参多糖
• PC12细胞
• 衰老
• 线粒体
• 自噬

目的:探讨人参多糖对D-半乳糖(D-Gal)诱导的大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞衰老损伤后自噬和相关信号途径的影响。方法:将PC12细胞分为正常对照组、模型组、人参多糖组。除正常对照组外,其余各组用含20 mg/mL D-Gal的培养基损伤24 h;人参多糖组加入终浓度分别为65、75μg/mL人参多糖作用24 h。CCK-8法检测人参多糖对细胞活力的影响;β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老;流式细胞仪检测细胞周期、活性氧(ROS)及线粒体膜电位(MMP);Seahorse代谢分析系统结合ATP生成量评估线粒体功能;免疫蛋白印迹法检测自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3B(LC3B-Ⅱ)、泛素结合蛋白P62(P62)]和自噬相关信号通路Parkin、PINK 1蛋白表达。结果:与正常对照组比较,D-Gal可引起细胞衰老,表现为细胞活力降低,β-半乳糖苷酶阳性染色率增加,细胞周期G1阻滞;与模型组比较,人参多糖75μg/mL组线粒体膜电位升高,ATP升高(P<0.05～P<0.01);与模型组比较,人参多糖各组线粒体最大呼吸速率及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平上升,活性氧降低,P62表达下降(P<0.001),Parkin、PINK 1蛋白的表达趋势与LC3Ⅱ/Ⅰ的结果一致(P<0.05～P<0.001)。结论:人参多糖可能通过影响PINK1/Parkin途径调控线粒体自噬,维系线粒体稳态,改善D-Gal引起的PC12细胞衰老,保护受损细胞。

• 单位
  长春中医药大学