毒胡萝卜素诱导大鼠冠状动脉平滑肌细胞内质网应激模型的建立

作者：陈肖燕; 邓春玉; 邝素娟; 杨慧; 饶芳; 单志新; 林秋雄; 姜立

来源：中国病理生理杂志, 2017, 33(01): 128-132.

• 冠状动脉平滑肌细胞
• 组织块贴壁法
• 内质网应激

目的:探讨SD大鼠冠状动脉平滑肌细胞(coronary artery smooth muscle cells,CASMCs)原代培养方法,并建立CASMCs内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)模型。方法:用组织块贴壁法培养CASMCs,光学显微镜观察细胞形态。免疫荧光技术检测CASMCs的标志分子α-SMA和SM-MHC的表达。采用Western blot检测ERS发生的标志物BiP和CHOP的蛋白表达水平。结果:冠状动脉组织块贴壁培养6 d后,细胞从组织块边缘爬出,呈长梭型,910 d细胞生长汇合后表现出平滑肌细胞典型的"峰-谷"状。免疫荧光技术鉴定结果显示,α-SMA和SM-MHC表达呈阳性。不同浓度(0.5、1和2μmol/L)的毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)处理CASMCs 24 h后,Western blot结果显示,TG(1和2μmol/L)处理组的BiP和CHOP蛋白表达与对照组相比增加,差异具有统计学意义。与对照组相比较,1μmol/L TG处理CASMCs 24和48 h后BiP和CHOP蛋白表达显著性增加。结论:采用组织块贴壁法可以成功培养CASMCs。利用1μmol/L TG诱导24 h可建立CASMCs的ERS模型。

• 单位
  广东省人民医院; 汕头大学医学院; 广东省医学科学院