真核表达载体pcDNA3.1-3a的构建及其在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中的表达

作者：秦怀洲; 张治国; 王举磊; 吴琳; 李立宏; 高国栋

来源：中国临床神经外科杂志, 2011, (09): 541-544.

• DNA甲基化酶
• 真核表达载体
• 神经母细胞瘤 DNA methyltransferase
• Eukaryotic expression vector
• Neuroblastoma

目的在pcDNA3.1真核表达载体中构建表达融合myc/his标签的甲基化酶表达载体pcDNA3.1-3a,并在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞中进行验证,以期获得可表达甲基化酶催化结构域的融合基因。方法以甲基化酶的pcDNA4.0-GBD-3a-myc/his质粒为模板,通过PCR的方法扩增获得融合有myc/his标签序列的目的区段--甲基化酶催化结构域3a,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1;以EcoRⅠ、EcoRⅤ双酶切和PCR方法对构建的表达载体进行鉴定,并通过测序证明载体构建正确,同时检测甲基化酶3a在SK-N-SH细胞中的表达。结果通过PCR方法获得了含有甲基化酶催化结构域...

• 单位
  第四军医大学