金黄色葡萄球菌新型耐热核酸酶(Nuc2)的定点突变与特性分析

作者：陈丽敏; 施春雷; 王大鹏; 张道锋; 史贤明

来源：食品工业科技, 2015, 36(17): 156-169.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2015.17.023

• 金黄色葡萄球菌
• 新型耐热核酸酶
• 定点突变
• 二级结构

本研究选取了F60、A62、T102和Y135这4个可能的关键位点,采用定点突变的方法成功构建了5个Nuc2的单点和多点突变体。体外表达并纯化这些核酸酶,对其活性、耐热性和二级结构进行测定。结果表明:经方差分析(p<0.05),T102M和F60A/A62L/T102M/Y135V的核酸酶活性与野生型相比较显著下降,并且F60A/A62L/T102M/Y135V的酶活性基本丧失;T102M和F60A/A62L的耐热性明显弱于野生型;T102M和F60V/A62L的二级结构中α-螺旋结构的含量明显低于野生型,F60A/A62L/T102M/Y135V的二级结构中包含有无规卷曲。因此,推断T102是维持Nuc2核酸酶活性、耐热性和二级结构稳定的一个关键位点;F60、A62、T102和Y135及其与邻近氨基酸之间的相互作用对维持Nuc2的性质稳定起着重要作用。

• 单位
  上海交通大学; 微生物代谢国家重点实验室