携带IL-10基因双歧杆菌载体的构建及鉴定

作者：张定国; 姚君; 朱忠生; 赖明广; 魏铖; 王立生

来源：中国基层医药, 2015, 22(08): 1136-1138.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1008-6706.2015.08.006

• 长双歧杆菌
• IL-10
• 穿梭质粒
• 构建
• 鉴定

目的构建并鉴定携带人IL-10基因的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭分泌型表达载体,探索基因治疗的新型载体。方法选择以往试验已构建好的质粒载体pBADs-GFP与生物合成的含有hIL-10质粒,通过双酶切、酶连反应构建并鉴定pBADs-hIL-10穿梭质粒,将pBADs/hIL-10质粒电转化入长双歧杆菌(NCC2705),合成BL-hIL-10,筛选出阳性克隆菌株,用RT-PCR法验证质粒hIL-10的基因表达后,以0.2%L-阿拉伯糖(L-Arb)诱导表达12 h、24 h、36 h后,分别用ELISA和Western blot法验证转基因双歧杆菌中hIL-10蛋白表达水平,并选择最佳的诱导表达时间。结果在长双歧杆菌NCC 2705中,成功的构建了能分泌hIL-10蛋白的BL-hIL-10传递体;其最佳诱导的表达时间是24 h。结论在长双歧杆菌(NCC 2705)内成功构建了一种新的、有效的IL-10的传递系统,BL-hIL-10能稳定表达具有生物活性的hIL-10蛋白。为IL-10转基因双歧杆菌治疗IBS的的研究奠定了基础。

• 单位
  第二临床医学院; 暨南大学; 深圳市儿童医院; 深圳市人民医院