雌激素刺激下人牙周膜干细胞成骨分化及通路间的交叉串扰

作者：金珂; 吴晓玲; 罗小玲; 胥鹏飞; 徐晓梅^*

来源：中国组织工程研究, 2022, 26(24): 3886-3891.

• 干细胞
• 人牙周膜干细胞
• 雌激素
• 成骨分化
• Wnt/β-catenin
• 2+" name="keyword">Wnt/Ca2+
• 串扰
• 通路

背景:以干细胞为基础的牙周组织再生工程为牙周病治疗提供了广阔前景。雌激素诱导的人牙周膜干细胞成骨分化与Wnt信号通路息息相关。目的:探讨雌激素刺激下Wnt/β-catenin和Wnt/Ca2+信号通路对人牙周膜干细胞成骨分化的影响及通路间的交叉串扰。方法:收集牙周状态健康的前磨牙,分离纯化培养人牙周膜干细胞,流式细胞仪检测表面标志物,茜素红和油红O染色检测成骨成脂分化潜能。取第3代人牙周膜干细胞,随机分为空白组、对照组、雌激素组、XAV939(Wnt/β-catenin通路抑制剂)组、L-690,330(Wnt/Ca2+通路抑制剂)组和XAV939+L-690,330组,除空白组外,其他组均进行成骨诱导培养。qRT-PCR和Western blot检测各组成骨标志物(Runx2、OCN)及Wnt/β-catenin和Wnt/Ca2+通路关键信号分子表达;Fluo-4荧光探针检测细胞内Ca2+浓度;碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性;茜素红染色检测成骨分化能力。结果与结论:(1)胶原酶消化法分离纯化培养的人牙周膜干细胞呈纺锤形、多边形,流式检测显示其表现出类似间充质干细胞的免疫表型,且具有成骨成脂分化潜能;(2)10-7 mol/L雌激素可上调人牙周膜干细胞内Ca2+浓度、Wnt/Ca2+通路关键信号分子CaMKII和NLK基因及CaMKII蛋白的表达;(3)联合使用Wnt/β-catenin和Wnt/Ca2+通路抑制剂能有效抑制细胞成骨分化;(4)单独使用任一通路抑制剂会上调另一通路活性,但对细胞的成骨分化无显著影响;(5)结果表明,雌激素通过Wnt/β-catenin和Wnt/Ca2+信号通路诱导人牙周膜干细胞成骨分化,且两通路间存在交互串扰,共同促进人牙周膜干细胞的成骨分化。

• 单位
  西南医科大学