嗜水气单胞菌fla基因重组植物乳杆菌的构建及其表达产物的免疫原性分析

作者：魏俊锋; 于华波; 王红; 李晓彤; 单晓枫^*; 张冬星^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (15): 109-114.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.09.0183

• 嗜水气单胞菌
• 鞭毛蛋白
• 基因重组
• 重组植物乳杆菌
• 免疫原性

为了检测嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)鞭毛(flagellum, fla)基因在重组植物乳杆菌中表达产物的免疫原性，试验将目的基因fla与表达载体pPG结合，通过电击法将其转至植物乳杆菌感受态细胞中，构建重组植物乳杆菌Lp-pPG-fla,通过Western-blot检测重组植物乳杆菌fla蛋白的表达情况。将120尾鲫鱼随机分为Lp-pPG-fla组、Lp-pPG组和PBS组，各组分别连续口服Lp-pPG-fla、Lp-pPG和PBS 28 d,分别在0(免疫前)及开始免疫后第7,14,21,28天时采集血清，通过ELISA试剂盒检测血清中免疫球蛋白(Ig)M的含量，溶菌酶(LYS)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。在第29天(口服结束后第1天)进行免疫保护性试验，观察2周并记录死亡情况，计算免疫保护率。结果表明：成功构建了重组植物乳杆菌Lp-pPG-fla,获得的fla蛋白条带大小为38 ku。免疫后Lp-pPG-fla组鲫鱼血清中IgM含量在7,14,21,28天极显著高于其他两组(P<0.01),Lp-pPG组和PBS组之间差异不显著(P>0.05);LYS活性在14,21,28天极显著高于其他两组(P<0.01),Lp-pPG组和PBS组之间差异不显著(P>0.05);AKP活性在7,14,21,28天极显著高于其他两组(P<0.01),Lp-pPG组和PBS组之间差异不显著(P>0.05);SOD活性在14,21,28天极显著高于其他两组(P<0.01),在第7天时显著高于其他两组(P<0.05),LP-PPG组和PBS组之间差异不显著(P>0.05)。对鲫鱼攻毒后，Lp-pPG-fla组的免疫保护率达到60%,远高于对照组。说明用重组植物乳杆菌免疫鲫鱼可以提高其免疫能力。

• 单位
  吉林农业大学