结核分支杆菌Rv3117基因的克隆与原核表达

作者：刘杨; 宋纪伟; 曾范利; 时坤; 李健明; 杜锐

来源：动物医学进展, 2015, 36(05): 15-18.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2015.05.007

• 结核分支杆菌
• Rv3117基因
• 克隆
• 原核表达

以结核分支杆菌H37Rv株染色体DNA为模板,应用Rv3117基因特异性引物对该基因进行PCR扩增,获得约800bp的DNA片段。将PCR纯化产物克隆至pMD-18T Vector中,构建出重组质粒pMD-18T-Rv3117。以EcoRⅠ和SamⅠ双酶切pMD-18T-Rv3117重组载体和pGEX-4T-1原核表达载体,并将纯化的Rv3117基因亚克隆至pGEX-4T-1中,构建出原核重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3117。将pGEX-4T-1-Rv3117重组质粒转化至感受态E.coli BL21中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约30ku目的蛋白带。Western blot分析结果显示,该蛋白能与抗结核分支杆菌阳性血清发生特异性反应。研究结果为结核病临床诊断抗原的筛选奠定了基础。

• 单位
  吉林农业大学; 吉林市人民医院