Flt-1胞外Ⅲ区蛋白的可溶性表达、纯化及活性测定

作者：谢印良; 谷岳; 黄蕊; 李雪霞; 杜雪; 王金宏; 熊冬生; 杨纯正; 许元富

来源：生物工程学报, 2009, (04): 580-586.

DOI：10.13345/j.cjb.2009.04.008

• 血管内皮生长因子受体1
• 血管新生
• 血管内皮生长因子165 Flt-1
• angiogenesis
• VEGF165

本研究旨在克隆和表达人血管内皮生长因子受体-1胞外Ⅲ区蛋白,并测定其生物学活性。应用RT-PCR法从人脐静脉内皮细胞中克隆Flt-1胞外Ⅲ区基因片段,经测序鉴定后再克隆到原核表达载体pAYZ中,构建出的表达载体pAYZflt-1Ⅲ转化大肠杆菌16C9后,用低磷培养基诱导表达目的蛋白;采用E-tag亲和层析柱纯化目的蛋白;用SDS-PAGE、Western blotting和BCA法对其进行定性、定量检测鉴定;用ELISA、损伤愈合试验和Transwell法检测靶蛋白生物学活性。克隆的Flt-1胞外Ⅲ区基因经测序鉴定正确。所构建的pAflt-1Ⅲ表达载体经低磷培养基诱导后高表达出可溶性Flt-1...

• 单位
  中国医学科学院北京协和医学院; 天津医科大学总医院; 实验血液学国家重点实验室