分离、纯化及鉴定肝细胞和免疫细胞分泌的HMGB1

作者：萧梅芳; 戴霞红; 周蓉蓉; 刘建平; 章保新; 赵树山; 范学工

来源：中南大学学报(医学版), 2011, 36(11): 1065-1070.

• 高迁移率族蛋白1
• 分离纯化
• HepG2细胞
• U937细胞

目的:分离纯化肝细胞HepG2与免疫细胞U937分泌的高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1),并加以鉴定。方法:体外培养人肝细胞HepG2与免疫细胞U937,采用400 ng/mL的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激20 h后收集细胞培养液上清。采用超滤浓缩,阳离子交换层析,阴离子交换层析,Sephadex G75凝胶过滤层析结合免疫沉淀的方法,进行分离纯化;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western印迹进行蛋白分子质量及性质鉴定。结果:2株细胞分离纯化得到的蛋白经SDS-PAGE鉴定其纯度达90%以上,分子质量约为26 kD,Western印迹鉴定为HMGB1。结论:该纯化方法可获得纯度较高的HMGB1。

• 单位
  中南大学湘雅医院; 中南大学