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摘要
目的探讨miR-582-5p在人甲状腺乳头状癌(PTC)组织中的表达及其靶向调控AKT3对PTC细胞增殖和凋亡的影响。方法选取2017年1月至2017年10月海南省肿瘤医院手术切除的PTC组织及癌旁组织(距离肿瘤边缘12 cm)标本各10例,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测PTC组织和癌旁组织中miR-582-5p表达;培养人PTC K1细胞,待细胞生长融合度达到50%60%时分为miR-582-5p mimics组、miR-582-5p反义miRNA寡核苷酸(AMO)组、mimics对照组和AMO对照组,进行细胞转染;细胞转染后,采用实时荧光定量PCR检测4组K1细胞中miR-582-5p表达,四甲基偶氮唑盐法检测4组K1细胞活性,平板克隆形成实验检测4组K1细胞克隆能力,锥虫蓝染色检测4组K1细胞存活率,末端脱氧核苷酰基转移酶介导性d UTP切口末端标记法检测4组K1细胞凋亡情况,Western blot法检测4组K1细胞中miR-582-5p靶基因AKT3蛋白表达。结果 PTC组织和癌旁组织中miR-582-5p相对表达量分别为0. 372±0. 237、1. 010±0. 083,PTC组织中miR-582-5p相对表达量显著低于癌旁组织(P <0. 05)。miR-582-5p mimics组、mimics对照组、AMO对照组和miR-582-5p AMO组K1细胞中miR-582-5p相对表达量分别为14. 143±2. 318、1. 063±0. 214、1. 041±0. 372、0. 435±0. 145; miR-582-5p mimics组K1细胞中miR-582-5p相对表达量显著高于mimics对照组、miR-582-5p AMO组和AMO对照组(P <0. 05),miR-582-5p AMO组K1细胞中miR-582-5p相对表达量显著低于AMO对照组和mimics对照组(P <0. 05),mimics对照组与AMO对照组K1细胞中miR-582-5p相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。细胞培养0 h时4组K1细胞活性比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。细胞培养12、24、36、48 h时,miR-582-5p mimics组K1细胞活性显著低于miR-582-5p AMO组、mimics对照组和AMO对照组(P <0. 05),miR-582-5p AMO组K1细胞活性显著高于mimics对照组和AMO对照组(P <0. 05),mimics对照组与AMO对照组K1细胞活性比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。mimics对照组、miR-582-5p mimics组、AMO对照组、miR-582-5p AMO组K1细胞克隆数量分别为18. 47±5. 25、5. 10±4. 97、19. 53±6. 45、32. 63±7. 74; miR-582-5p mimics组K1细胞克隆数量显著少于mimics对照组、AMO对照组和miR-582-5p AMO组(P <0. 05),miR-582-5p AMO组K1细胞克隆数量显著多于AMO对照组和mimics对照组(P <0. 05),mimics对照组与AMO对照组K1细胞克隆数量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。mimics对照组、miR-582-5p mimics组、AMO对照组和miR-582-5p AMO组K1细胞存活率分别为(76. 46±13. 53)%、(42. 64±10. 85)%、(77. 82±10. 35)%、(83. 63±13. 53)%; miR-582-5p mimics组K1细胞存活率显著低于mimics对照组、AMO对照组和miR-582-5p AMO组(P <0. 05),miR-582-5p AMO组K1细胞存活率显著高于AMO对照组和mimics对照组(P <0. 05); mimics对照组与AMO对照组K1细胞存活率比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。mimics对照组、miR-582-5p mimics组、AMO对照组和miR-582-5p AMO组K1细胞凋亡率分别为(23. 35±9. 64)%、(42. 63±13. 38)%、(22. 85±9. 74)%、(10. 84±3. 64)%; miR-582-5p mimics组K1细胞凋亡率显著高于mimics对照组、AMO对照组和miR-582-5p AMO组(P <0. 05),miR-582-5p AMO组细胞凋亡率显著低于AMO对照组和mimics对照组(P <0. 05),mimics对照组与AMO对照组K1细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。mimics对照组、miR-582-5p mimics组、AMO对照组和miR-582-5p AMO组K1细胞中AKT3蛋白相对表达量分别为1. 000±0. 005、0. 531±0. 162、1. 010±0. 071、1. 432±0. 141; miR-582-5p mimics组K1细胞中AKT3蛋白相对表达量显著低于mimics对照组、AMO对照组和miR-582-5p AMO组(P <0. 05),miR-582-5p AMO组K1细胞AKT3蛋白相对表达量显著高于AMO对照组和mimics对照组(P <0. 05),mimics对照组与AMO对照组K1细胞AKT3蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 miR-582-5p在PTC组织中表达下调; miR-582-5p可通过靶向调控AKT3的表达而抑制人PTC细胞的增殖,并促进其凋亡。
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单位齐齐哈尔医学院; 海南省肿瘤医院
