应用抑制性消减杂交技术筛选HBeAg结合蛋白1反式激活基因

作者：严福明成军纪冬郭江杨瑗刘妍

来源：解放军医学杂志, 2005, (04): 286-289.

• 肝炎病毒
• 乙型
• 肝炎E抗原
• 乙型
• 反式激活
• 抑制性消减杂交 hepatitis B virus
• hepatitis B e antigens
• transactiviation
• suppression subtractive hybridization

目的筛选与克隆HBeAg结合蛋白1(HBEBP1)新基因的反式激活基因,了解其可能存在的调节功能线索。方法应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学(bioinformatics)技术筛选并克隆HBEBP1反式激活的新型靶基因。以HBEBP1表达质粒pcDNA3.1(-)HBEBP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与2种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠...

• 单位
  解放军第302医院; 北京地坛医院