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摘要
目的 探讨RPB5调节蛋白（RPB5-mediating protein,RMP）对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响以及通过腺苷酸激活蛋白激酶（adenosine 5’-monophosphate (AMP)-activated protein kinase,AMPK）通路调节线粒体稳态和氧化应激的作用机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测人输卵管上皮永生化细胞FTE-187与人卵巢癌细胞系SKOV3,A2780和HO8910中RMP基因的表达。以SKOV3细胞作为研究对象，利用siRNA技术敲低SKOV3细胞中RMP的表达，再通过qRT-PCR法验证RNAi效率。通过平板克隆形成实验和流式细胞技术观察敲低RMP表达后对SKOV3细胞增殖能力、周期分布及凋亡能力的影响。通过激光共聚焦显微镜观察敲低RMP表达后SKOV3细胞中线粒体形态的变化。Western blot进一步证实RMP调控线粒体稳态相关蛋白AMPK和p-AMPK以及凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达。采用ROS荧光法检测敲低RMP表达后对SKOV3细胞内ROS水平的影响。结果 RMP在FTE-187细胞中的表达水平为1.00±0.13，在A2780,HO8910和SKOV3细胞中的表达水平分别为1.58±0.19,1.88±0.17,2.15±0.10，较FTE-187中的表达显著上升，差异有统计学意义（F=72.035,P <0.001）。SKOV3细胞转染后，RMP-siR组RMP表达水平为0.86±0.20，较control组（2.06±0.11）和NC-siR组（1.92±0.23）显著下降，差异有统计学意义（F=90.220,P <0.001）。平板克隆形成实验和流式细胞检测结果表明，敲低RMP可以通过引起G2/M期阻滞导致卵巢癌细胞增殖障碍，促进卵巢癌细胞凋亡。通过激光共聚焦显微镜观察到敲低RMP表达后，SKOV3细胞中点状的线粒体明显增多，线粒体的碎片化也增多，导致线粒体稳态失衡。Western blot结果表明，control组和NC-siR组p-AMPK表达水平分别为0.75±0.12,0.77±0.17，敲低RMP表达后，p-AMPK表达水平为1.39±0.33，较control组和NC-siR组升高，差异有统计学意义（F=46.550,P <0.001）。control组和NC-siR组凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值分别为0.55±0.11和0.56±0.08，敲低RMP表达后，Bax/Bcl-2比值增加为1.57±0.22，差异亦有统计学意义（F=62.027,P <0.001）。荧光显微镜观察到，control组和NC-siR组荧光强度分别为100.24%±8.76%和103.07%±7.93%，敲低RMP后其荧光强度为295.14%±12.10%，显著高于control组和NC-siR组，差异有统计学意义（F=392.708,P <0.001）。结论 RMP在卵巢癌细胞中呈高表达，敲低RMP表达后可以通过激活磷酸化AMPK通路导致卵巢癌细胞线粒体稳态失衡和氧化应激，诱导卵巢癌细胞在G2/M期发生阻滞，进而抑制卵巢癌细胞增殖，促进其凋亡。
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单位电子科技大学; 绵阳市中心医院
