细粒棘球蚴Eg HSP20蛋白基因的分子特征、表达及其反应原性研究

作者：陈英; 乔军; 孟庆玲^*; 钟文强; 刘田莉; 贡莎莎; 王熙凤; 黄运福; 才学鹏

来源：西南农业学报, 2018, 31(07): 1547-1552.

DOI：10.16213/j.cnki.scjas.2018.7.036

• 细粒棘球蚴
• Eg HSP20抗原基因
• 克隆
• 表达
• 反应原性

【目的】本文构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)HSP20基因的重组表达载体并表达、纯化重组蛋白,研究其反应原性。【方法】根据Gen Bank中Eg HSP20蛋白基因c DNA序列设计特异性引物,以细粒棘球蚴Eg头节总RNA为模板,进行RTPCR扩增,将PCR产物克隆至p MD19-T载体,测序验证后,将Eg HSP20抗原基因亚克隆至表达载体p ET-32a中,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞内,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行纯化及反应原性分析。【结果】Eg HSP20 c DNA全长945个核苷酸,编码314个氨基酸。该多肽含有1个N端糖基化位点,1个CAMP磷酸化位点,5个PKC磷酸化位点,10个CKⅡ磷酸化位点;抗原表位区集中在3953位和120168位。SDS-PAGE检测显示,重组菌可表达分子量为51 k Da的重组蛋白;Western blot结果显示,表达的重组蛋白Eg HSP20抗原能与Eg阳性血清发生特异性反应。【结论】证实Eg HSP20蛋白具有较强的反应原性,为进一步利用Eg HSP20重组蛋白作为Eg感染诊断中候选标识分子奠定了前期基础。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 石河子大学