RAW264.7细胞不同自噬模型中miRNA表达谱的分析

作者：张爱君; 李艳宁; 高倩; 屈昱良; 蒋丹; 吴珊; 徐广贤

来源：生物技术, 2021, 31(05): 437-443+457.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2021.05.0066

• miRNAs
• 细胞自噬
• 表达谱
• 高通量测序

[目的]旨在研究RAW264.7细胞不同自噬模型中miRNA表达谱的差异,并探究miRNA在细胞自噬过程中的作用和调控机制。[方法]利用雷帕霉素(rapamycin,RAPA)和3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)分别作用于小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞,建立自噬诱导模型和自噬抑制模型,以未处理组作为对照组;提取各组总RNA,构建miRNA文库,通过高通量测序技术筛选出差异表达的miRNA,对其靶基因mRNA进行GO和KEGG分析;随机选取5个差异表达的miRNA进行RT-PCR验证。[结果]通过miRNA差异分析发现,mmu-miR-210-5p、mmu-miR-7648-3p、mmu-miR-34b-3p、mmu-miR-7038-5p等8个miRNA在RAPA组和3-MA组中呈现显著相反表达趋势;对其靶基因进行预测分析,发现部分靶基因与自噬发生发展过程相关; RT-PCR验证其中5个差异miRNA的表达水平,发现与高通量测序结果相一致。[结论]不同自噬模型中的miRNA表达谱存在明显差异,可能参与细胞自噬的调控,可以此为靶点为自噬分子调节机制的相关研究提供基础。

• 单位
  中国人民解放军空军军医大学; 宁夏医科大学; 广东医科大学