PLCE1基因及rs2274223和rs3765524单体型的克隆与表达

作者：李达; 代鹏; 王伟; 张文涛; 汪钦; 束毅; 祝春来; 纪奇峰; 梁平; 颜真

来源：中国生物工程杂志, 2016, 36(12): 1-7.

DOI：10.13523/j.cb.20161201

• 磷脂酶C-ε1
• 单核苷酸多态性
• 重叠延伸PCR
• 基因克隆
• 基因表达

目的:克隆人PLCE1基因,构建PLCE1 rs2274223和rs3765524 GT(PLCE1 Minor)和AC(PLCE1 Major)单体型真核表达重组载体,研究PLCE1基因多态性及单体型与基因表达的相关性。方法:利用重叠延伸PCR、In-Fusion技术构建PLCE1真核表达载体;基于同源重组的双点突变技术改造目的基因;利用基因转染、实时定量PCR和蛋白印迹等技术实现PLCE1表达载体在真核细胞中的过表达及表达水平的鉴定。结果:成功扩增并获得了全长6 927bp的人PLCE1 cDNA并经过DNA测序证实,与NCBI数据库PLCE1参考序列(NM016341)比较,发现编码区3 5543 572bp处存在18bp连续碱基插入,其余序列基本匹配。成功构建了PLCE1 Minor和PLCE1 Major两种单体型重组真核表达载体,转染细胞揭示PLCE1 Minor型的mRNA转录和蛋白质表达水平均高于Major型。结论:发现了一种新的PLCE1 mRNA转录本,成功构建了2种单体型真核表达载体;发现PLCE1 rs2274223G-rs3765524T单体型能够促进自身mRNA和蛋白质表达,为进一步揭示PLCE1 SNPs与癌症易感性的关系奠定了基础。

• 单位
  第四军医大学